Techniques d'observation en microscopie

L'observation en fond clair est la technique de microscopie la plus simple. Dans ce système, la lumière traverse ou est réfléchie par l'échantillon, sans aucune altération, au-delà de celle provoquée par l'échantillon lui-même.

Toute la lumière du spécimen et de l'environnement est collectée par l'objectif pour former une image sur un fond entièrement lumineux. Ce type d'observation est le plus adapté aux échantillons colorés ou avec des pigments naturels et très contrastés.

Il est largement utilisé en pathologie et en histologie végétale et animale, pour l'observation de coupes de tissus fins, l'échantillon contrasté apparaît sous un fond clair. Cependant, il n'est pas trop utile pour l'observation de cellules vivantes.

La technique d'observation en fond noir est une technique de contraste, sans lumière directe, où seule la lumière diffractée de l'échantillon est utilisée pour former l'image.

Dans cette technique, les échantillons doivent être transparents et ne pas tacher. L'échantillon de lumière doit être contrôlé de sorte que la lumière centrale soit bloquée. L'éclairage (grâce au condenseur) forme un cône creux, avec seulement une lumière oblique, qui se reflète sur l'échantillon et l'environnement. L'image est formée de rayons lumineux diffusés par l'échantillon et la platine, qui sont capturés par la cible.

C'est une technique appropriée pour observer des cellules et des organismes vivants. Il en est ainsi, car le contraste est créé par un organisme lumineux sur un fond sombre, nous révélons ainsi les arrière-plans, les bords et les contours de l'organisme. L'une des principales utilisations est en hématologie, sur les cellules sanguines vivantes.

La technique de contraste de phase correspond également à une technique d'observation de contraste, quelle que soit la redondance. Cela signifie que le résultat de l'image sera le fruit du passage de la lumière à travers l'échantillon, normalement vivant, et des différents indices de réfraction qui en découlent.

La lumière d'une lampe / ampoule halogène-tungstène est dirigée à travers une lentille collectrice et concentrée sur des anneaux de condenseur spécialisés. Les fronts d'onde passant à travers l'anneau illuminent l'échantillon et passent directement (ou diffractés) à travers l'échantillon et sont retardés par les gradients de phase de l'échantillon. La lumière non dirigée, diffractée et collectée par la lentille, est séparée par une plaque de phase et focalisée sur le plan intermédiaire de l'image pour former l'image finale.

Cette technique est utilisée dans l'observation de cellules vivantes ou dans l'étude de matériaux à feuilles très fines.

Le microscope à fluorescence est basé sur lequel les objets sont éclairés par des rayons d'une certaine longueur d'onde. L'image observée est le résultat d'un rayonnement électromagnétique émis par des molécules qui ont absorbé le rayonnement primaire et réémis de la lumière avec une longueur d'onde plus longue. Je veux dire, ils se sont excités. Pour ne transmettre que l'émission secondaire souhaitée, des filtres appropriés doivent être placés sous le condenseur et au-dessus de la cible.

Ainsi, nous pourrions déterminer cette technique d'observation comme indirecte, puisque l'observation ou le résultat est dû à la réaction de certaines molécules ou cellules sur un premier type de lumière ou de rayonnement qu'elles ont absorbé.

La microscopie à fluorescence est utilisée pour détecter certaines substances telles que la vitamine A ou les substances marquées au fluorochrome. Il permet également de déterminer la distribution d'une seule espèce de molécule, sa quantité et sa localisation à l'intérieur de la cellule. C'est une technique très spécifique et évoluée, mais en même temps largement utilisée en analyse biomoléculaire.